Detección de almidón en hoja
Protocolo: Detección de Almidón en Hojas
Mediante la Prueba del Yodo
Fundamento Teórico:
El almidón es el principal polisacárido de reserva en los vegetales. Se forma
en los cloroplastos durante la fotosíntesis. El yodo (I₂ en solución de yoduro
de potasio, KI) reacciona con el almidón formando un complejo de inclusión que
presenta una coloración azul-violácea
intensa característica.
Objetivo:
Comprobar la presencia de almidón como producto final del proceso de
fotosíntesis en una hoja.
Materiales e Insumos:
·
Muestra: Hojas frescas
(ej: geranio, espinaca).
·
Equipos:
o Mechero de alcohol o
Bunsen.
o Tripode y rejilla de
asbesto.
o Dos vasos de
precipitados (250-500 ml).
o Vidrio de reloj o placa
Petri.
o Pinzas metálicas o de
madera.
·
Reactivos:
o Etanol (alcohol etílico)
al 90-95%.
o Solución de Lugol.
o Agua destilada.
Procedimiento Paso a Paso
¡IMPORTANTE! Medidas de Seguridad:
·
Usar bata, guantes y gafas de seguridad.
·
El etanol es inflamable. APAGAR EL MECHERO antes de manipularlo.
·
Manejar con cuidado el material caliente.
Paso 1:
"Hervido de la Hoja" (Paso Crítico Agregado)
Objetivo: Ablandar los tejidos, romper las membranas celulares y
detener toda actividad enzimática que podría degradar el almidón.
1.
Llena un vaso de precipitados con agua destilada y llévalo a ebullición.
2.
Con la pinzas, sumerge la hoja en el agua hirviendo.
3.
Mantén la hoja en el agua hirviendo durante 1-2 minutos.
4.
Retira la hoja y colócala en el vidrio de reloj. Notarás que
está más flexible y de un verde más oscuro.
Paso 2:
"Despigmentación" de la Hoja
Objetivo: Eliminar los pigmentos (clorofila) que enmascaran la
observación.
1.
Llena otro vaso de precipitados con etanol.
2.
Sumerge la hoja hervida en el etanol.
3.
Calienta el vaso SUAVEMENTE
al BAÑO MARÍA (NUNCA directamente a la llama).
4.
Observa cómo el alcohol se torna verde y la hoja se vuelve
blanco-amarillenta.
5.
Retira la hoja despigmentada y colócala en el vidrio de reloj.
Paso 3:
"Hidratación" de la Hoja
Objetivo: Lavar el alcohol y ablandar la hoja quebradiza.
1.
Sumerge la hoja en un vaso con agua destilada tibia
durante 1 minuto.
Paso 4:
"Aplicación del Reactivo de Lugol"
Objetivo: Revelar la presencia de almidón.
1.
Coloca la hoja en una placa Petri.
2.
Cubre completamente la hoja con solución de Lugol.
3.
Deja actuar durante 2-3
minutos.
Paso 5:
"Observación y Registro"
1.
La aparición de coloración azul oscuro o negruzca indica presencia
de almidón.
2.
Un color amarillo-marrón (color del Lugol)
indica ausencia de almidón.
3.
Registra tus observaciones con dibujos o fotos.
¿Por Qué el Hervido Previo es Tan Importante?
1.
Detiene la
Actividad Enzimática: Al hervir la hoja, inactivamos enzimas como las amilasas
que podrían degradar el almidón durante el proceso de prueba, dando así un
falso negativo.
2.
Ablanda la
Cutícula y Pared Celular: Esto permite una mejor penetración del etanol y del Lugol
en las células, haciendo el proceso de despigmentación y tinción más eficiente
y rápido.
3.
Fija el
Almidón en su Lugar: Evita que el almidón se movilice o altere su distribución
original dentro de la hoja.
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