Extracción de ADN
Protocolo de Extracción Casera de ADN para Curso Terciario
Introducción Teórica
El ácido desoxirribonucleico (ADN) es la molécula portadora de la información genética en todos los organismos vivos. Su estructura de doble hélice, descubierta por Watson y Crick en 1953, constituye la base molecular de la herencia. La extracción de ADN es una técnica fundamental en biología molecular que permite aislar y purificar esta molécula para su posterior estudio.
Fundamentos Bioquímicos de la Extracción:
• Lisis celular: Ruptura de membranas celulares y nucleares mediante detergentes que disuelven lípidos
• Eliminación de proteínas: Uso de enzimas proteolíticas o métodos mecánicos
• Precipitación del ADN: Aprovechamiento de su baja solubilidad en alcohol para separarlo de otros componentes
Protocolo: Extracción Comparativa de ADN Humano y Vegetal
Objetivos
• Extraer ADN de muestras biológicas usando reactivos caseros
• Comparar características del ADN extraído de dos muestras distintas
• Visualizar las hebras del ADN cómo apoyo a un curso teórico
Materiales Requeridos
Reactivos:
• Detergente lavavajillas líquido
• Sal de mesa (NaCl)
• Alcohol etílico frío (preferiblemente 70-90%, mantener en freezer)
• Agua destilada
• Jugo de piña fresco o solución de ablandador de carne (opcional, para fruta)
Materiales:
• Tubos de ensayo o vasos transparentes
• Embudos
• Coladores o gasas
• Palitos de madera o varillas de vidrio
• Pipetas o jeringas
• Guantes de latex
• Rotulador permanente
Preparación de Soluciones
Solución de Lisis (preparar 100ml):
• 90 ml de agua destilada
• 10 ml de detergente lavavajillas
• 2 cucharaditas de sal de mesa
• Mezclar suavemente para evitar formación de espuma
Alcohol de Precipitación:
• Enfriar alcohol etílico a -20°C por al menos 2 horas
Procedimiento Experimental
Parte A: Extracción de ADN de Saliva Humana
1. Recolección de Muestra
o Enjuagar la boca con agua tibia durante 30 segundos
o Colectar aproximadamente 5 ml de saliva en un vaso limpio
2. Lisis Celular
o Transferir 3 ml de saliva filtrada a un tubo de ensayo
o Añadir 2 ml de solución de lisis
o Mezclar suavemente por inversión durante 2 minutos
o Incubar a temperatura ambiente durante 10 minutos
3. Precipitación del ADN
o Inclinar el tubo a 45°
o Añadir lentamente 5 ml de alcohol frío por la pared del tubo
o No mezclar - formar una interfase nítida
o Observar la formación de filamentos blancos en la interfase
4. Recolección del ADN
o Introducir cuidadosamente un palito de madera en la interfase
o Girar lentamente para enrollar el ADN precipitatado
o Transferir a un portaobjetos para observación
Parte B: Extracción de ADN de Fruta (Plátano o Fresa)
1. Preparación de Muestra
o Triturar 50g de fruta con 50ml de agua destilada
o Añadir una cucharada de jugo de piña (fuente de bromelina)
o Filtrar la mezcla através de un colador
2. Lisis Celular
o Combinar 5 ml del filtrado con 3 ml de solución de lisis
o Mezclar e incubar 15 minutos a 60°C (baño maría)
3. Precipitación y Recolección
o Seguir el mismo procedimiento que para saliva
o Comparar cantidad y apariencia del ADN obtenido
Mira estos videos para recordar el procedimiento
Comentarios
Publicar un comentario